細胞因子的檢測方法一.生物學檢測法
生物學檢測又稱生物活性檢測,是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。由于各種細胞因子具有不同的活性,例如IL-2促進淋巴細胞增殖,TNF殺傷腫瘤細胞,CSF刺激造血細胞集落形成,IFN保護細胞免受病毒攻擊,因此選擇某一細胞因子*的生物活性,即可對其進行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類:
1.細胞病變抑制法
病毒可造成靶細胞的損傷,干擾素等則可抑制病毒所導致的細胞病變,因此可利用細胞病變抑制法檢測這類因子。
2.細胞因子誘導的產物分析法
某些細胞因子可刺激特定細胞產生生物活性物質,如IL-2、IL-3誘導骨髓細胞合成胺、IL-6誘導肝細胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應產物,可反映細胞因子的活性。
3.靶細胞殺傷法
是根據某些細胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細胞而設計的檢測方法。通常靶細胞多選擇體外長期傳代的腫瘤細胞株,利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細胞的殺傷率。
4.細胞增殖法
許多細胞因子具有細胞生長因子活性,特別是白細胞介素,如IL-2刺激t細胞生長、IL-3刺激肥大細胞生長、IL-6刺激漿細胞生長等。利用這一特性,現已篩選出一些對特定細胞因子起反應的細胞,并建立了只依賴于某種因子的細胞系,即依賴細胞株(簡稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活,只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養基中很快死亡,而加入IL-2后則可右體外長期培養。在一定濃度范圍內,細胞增殖與IL-2量呈正比,因此通過測定細胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外,還有一些短期培養的細胞,如胸腺細胞、骨髓細胞、促有絲分裂原刺激后的淋巴母細胞等,均可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。