細胞因子是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。
但是,由于細胞因子在體內的含量甚微,給細胞因子的檢測帶來困維,細胞因子的檢測尚未在臨床診斷上廣泛開展,已知目前采用的細胞因子檢測方法均不完善,且不同的檢測方法所得的結果差異較大,給臨床診斷與治療帶來一定的困難。因此,有必要了解各種檢測方法的特性及影響因素。
目前,細胞因子生物學活性檢測和濃度測定方法主要有以下幾類:
一.生物學檢測法
生物學檢測又稱生物活性檢測,是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。由于各種細胞因子具有不同的活性,例如IL-2促進淋巴細胞增殖,TNF殺傷腫瘤細胞,CSF刺激造血細胞集落形成,IFN保護細胞免受病毒攻擊,因此選擇某一細胞因子*的生物活性,即可對其進行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類:
1.細胞增殖法
許多細胞因子具有細胞生長因子活性,特別是白細胞介素,如IL-2刺激t細胞生長、IL-3刺激肥大細胞生長、IL-6刺激漿細胞生長等。利用這一特性,現已篩選出一些對特定細胞因子起反應的細胞,并建立了只依賴于某種因子的細胞系,即依賴細胞株(簡稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活,只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養基中很快死亡,而加入IL-2后則可右體外長期培養。在一定濃度范圍內,細胞增殖與IL-2量呈正比,因此通過測定細胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外,還有一些短期培養的細胞,如胸腺細胞、骨髓細胞、促有絲分裂原刺激后的淋巴母細胞等,均可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。
2.靶細胞殺傷法
是根據某些細胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細胞而設計的檢測方法。通常靶細胞多選擇體外長期傳代的腫瘤細胞株,利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細胞的殺傷率。
3.細胞因子誘導的產物分析法
某些
細胞因子可刺激特定細胞產生生物活性物質,如IL-2、IL-3誘導骨髓細胞合成胺、IL-6誘導肝細胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應產物,可反映細胞因子的活性