Elisa試劑盒競爭法測抗原的操作方法:
1.包被抗體:用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度(1~10μg/ml),每凹孔加0.3ml,4℃過夜,或37℃水浴3小時,貯存冰箱。
2.洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。
3.分2組,a組加酶標記抗原和被檢抗原混合液0.2ml,b組只加酶標記抗原液0.2ml,37℃作用1~2小時。(混合液可作成不同稀釋度)
4.洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。
5.加入0.2 ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT),室溫作用30分鐘(另作一空白對照,0.4ml底物加0.1ml終止劑)。
6.加終止劑:每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。
7.用酶標比色計測定a、b兩組OD值,并求出a、b、OD值的差數(shù)。
本方法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面,我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個過程,稱為包被,也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,而另一組只加酶標記抗原,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為我們所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只要有一個結合部位即可,因此,對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點是快,因為只有一個保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標記抗原為其缺點。