流式抗體能夠在短時間內檢測分析或分選大量細胞,在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學等領域中的應用越來越廣泛。其純度、批次穩定性、特異性,以及流式結果的可重復性備受重視。
流式抗體的基本結構:
一個抗體分子上的兩個抗原結合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部稱結晶片段(crystalline fragment,Fc),糖結合在FC 上。Fab是抗原結合片段,直接結合抗原。直接效應。Fc是結晶片段,間接效應端。
抗體與細胞的結合過程中一般會出現以下情況:
在抗體孵育過程中,只有抗體的Fab端與目標抗原結合(特異性結合)時,這樣的流式圖才能反應出細胞抗原表達的真實情況。
但是,在分子間各種作用力的推動下,抗體FC端也經常與細胞表面的FC受體結合,即我們常說的非特異性結合,此時流式結果就往往不能反映真正的抗原表達情況。
那么,我們在實驗中如何避免這種非特異性情況的出現呢?
FC受體封閉:
加入FC受體封閉劑,對細胞膜表面的FC受體提前進行人工封閉干預;或做CD16/CD32抗體封閉實驗;
同型對照(Isotype)抗體;
重組基因工程改造抗體(REAfinity? Recombinant Antibodies)。