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技術(shù)文章

細(xì)胞株培養(yǎng)技術(shù)說明與分享點(diǎn)擊次數(shù):1575 更新時間:2020-06-11

細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。國內(nèi)資深的細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。下面分享細(xì)胞株培養(yǎng)技術(shù)的三大要點(diǎn):

1、取材

細(xì)胞株培養(yǎng)的材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,取材時避免用壞死組織,要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位,瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。細(xì)胞株的培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細(xì)胞排除

在細(xì)胞株培養(yǎng)中常混雜有一些成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時能與瘤細(xì)胞同時生長,并常壓過癌細(xì)胞,導(dǎo)致癌細(xì)胞生長受阻以至消失,應(yīng)仔細(xì)排除。排除方法常有:機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),細(xì)胞株要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長因子,根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子,如胰島素、雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

總而言之,在細(xì)胞株待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后,可轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加培養(yǎng)基,常溫培養(yǎng)半個月,一般每隔一周觀察一次,決定是否換液、傳代,靠譜的細(xì)胞株的每個步驟都至關(guān)重要。細(xì)胞生長達(dá)一定數(shù)量后凍存,凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。

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