蛋白提取操作時應注意的細節
總體規則:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白質的步驟中,早些抑制,經常抑制
分裝蛋白溶液,儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中,測蛋白活性,找出適宜儲存條件。
冷藏,并加入穩定劑。這些穩定劑一般都能充分保持蛋白的生物學活性。
將蛋白溶液儲于50%(V/V)的甘油或懸于硫酸銨(3.2M)中,避免凍存
冰結晶會造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復凍融,如果酶需要凍存,分裝成小管后凍存。
蛋白質的儲存:
蛋白樣品在液氮中速凍,拿出后加入10-20%的甘油,長期儲存
整個實驗過程中,都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時,都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩,避免溶液中混入蛋白變性劑
實驗的過程中應避免灰塵進入,灰塵包含60%的肌氨酸
操作過程中:
操作時總是小體積小量的操作,避免污染,并且動作要快