細(xì)胞因子是一類由各種免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的具有生物活性的多肽或糖蛋白。通常所說的細(xì)胞因子包括淋巴細(xì)胞因子、單核細(xì)胞因子及其他細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。細(xì)胞因子種類繁多,其生物學(xué)活性也復(fù)雜多樣,對有關(guān)它們在機(jī)體正常狀態(tài)的維持和不同疾病發(fā)生中的作用的研究報(bào)道也越來越多。
細(xì)胞因子常用的標(biāo)本類型:
全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時(shí)內(nèi)分析,超過8小時(shí)會導(dǎo)致活性的損失,一般細(xì)胞因子陽性細(xì)胞會減少5%。如不能在8小時(shí)之內(nèi)檢測,應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。
自身血漿中外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs):使用肝素鈉抗凝的采血后,分離PBMCs,24小時(shí)內(nèi)分析。
組織培養(yǎng)基中的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs):用Ficoll分離PBMCs,將細(xì)胞重懸于含10%熱滅活胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2×106細(xì)胞/ml。
調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度2×106細(xì)胞/mL于新鮮培養(yǎng)基中。
冰凍全血與PBMCs:使用1×紅細(xì)胞裂解液處理活化的外周血或者PBMCs,用PBS漂洗,并用含1%的BSA及10%的DMSO的PBS重懸,-70℃凍存。溶化后細(xì)胞置于染色管中,加上2~3mL的洗液,離心5分鐘后,用破膜劑對細(xì)胞進(jìn)行破膜和染色。