Elisa試劑盒可以大規(guī)模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進(jìn)行檢測,免疫酶技術(shù)都能在較短時間內(nèi)完成。其靈敏度高。由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),顯示抗原與抗體的結(jié)合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。
Elisa試劑盒的實驗在必定溫度下的反響時刻并不是反響的結(jié)尾,溫育時刻過短、溫度過低,易致顯色不全;溫育時刻過長、溫度過高,易致非特異性緊附于反響孔周圍,難以清潔*,發(fā)生陰性高值或假陽性反響。要嚴(yán)厲按規(guī)則的溫度和溫育時刻進(jìn)行。如果參加的酶物過多或加在較高的孔壁上或孔口,也會致使本底添加或假陽性。水浴箱門,嚴(yán)厲控制水浴的溫度為37±0.5。同時,微孔板不可堆疊放置,以確保傳熱均勻,各板的溫度都能敏捷到達(dá)平衡。
當(dāng)標(biāo)本收集保留不妥發(fā)生溶血時,紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中,血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì),其通過吸附或“PP效應(yīng)"(蛋白質(zhì)間相互吸附的景象)后,可催化A、B液顯色而形成假陽性。
因為試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為37度,在這個溫度下溫育必定時刻,蒸騰的水分會許多,關(guān)于全部反響系統(tǒng)來講,各種反響物的濃度會不斷地添加,這么必會致使反響zui終的值添加。
如果ELISA試劑盒樣品稀釋液少加或血清多加,都會致使本底增高。關(guān)于間接法來說,受上述兩個因素影響更大。
因為血清中受檢的特異性IgG只,IgG中的一小有些。IgG的吸附性很強(qiáng),非特異性IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的外表。
ELISA試劑盒實驗時,這些非特異性的IgG均能夠和酶標(biāo)二抗發(fā)作反響而形成較高陰性本底或假陽性。假如參加的血清過多,高于規(guī)則的稀釋倍數(shù),很容易形成高值陰性。反之,形成假陰性。