凋亡試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè),則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài),才可以進(jìn)行檢測(cè)。
一、凋亡試劑盒的細(xì)胞凋亡原理:
細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界,既發(fā)生于生理狀態(tài)下,也發(fā)生于病理狀態(tài)下。細(xì)胞凋亡對(duì)胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生(morphogenesis)、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng)、疾病或中毒時(shí)引起的細(xì)胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用。
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期,PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35.8KD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素FITC標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
二、凋亡試劑盒的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象:
細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期,細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低,對(duì)側(cè)向光散射的能力增加或沒(méi)有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,前向和側(cè)向光散射的信號(hào)均降低。因此可通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞光散射的變化觀(guān)察細(xì)胞凋亡情況。
細(xì)胞凋亡過(guò)程的形態(tài)變化說(shuō)明
細(xì)胞凋亡是個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,我們?cè)诹私夥治鏊耐瑫r(shí)在記錄著它的細(xì)胞變化形態(tài),由此我們將其變化的過(guò)程分為三個(gè)大的階段:
1.首先是是細(xì)胞體積縮小,胞漿凝縮,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合,核糖體、線(xiàn)粒體等聚集,但結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變,染色質(zhì)逐漸凝聚成新月?tīng)罡皆诤四ぶ苓叄葔A性增強(qiáng),核固縮呈均一的致密物,進(jìn)而斷裂,胞膜仍完整
2.其次就是胞膜不斷出芽、脫落,細(xì)胞變成數(shù)個(gè)大小不等的由膜包裹的凋亡小體(apoptotic bodies)。
3.凋亡小體被周?chē)哂型淌晒δ艿募?xì)胞如巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞等吞噬、降解。在凋亡發(fā)生的全過(guò)程中,細(xì)胞膜一直保持完整,胞內(nèi)容物不釋放出來(lái),所以不引起周?chē)难装Y反應(yīng)。同一組織中,不同細(xì)胞發(fā)生凋亡的過(guò)程并不同步。