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熒光顯微鏡觀察細胞熒光染色點擊次數:4153 更新時間:2011-09-15

                                        熒光顯微鏡觀察細胞熒光染色

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一、熒光顯微鏡的成像原理

熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學顯微鏡,其基本原理是利用一定波長的激發光對樣品進行激發,使之產生一定波長的熒光,從而用于對樣品結構或其組分進行定性、定位、定量觀察檢測。
什么是熒光?
物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態,再回到低能狀態時釋放出的光。
即:物質吸收短波光,發射出的長波光。
 
熒光的性質
保持固有的熒光特性
熒光波長>激發波長
熒光強度極小于激發光的強度
有不同程度的衰減
熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃度、熒光效率
熒光顯微鏡的優點和用途(生物秀儀器頻道www.bbioo.com)
優點:
檢出能力高
對細胞的刺激小
能進行多重染色
用途:
物體構造的觀察
熒光的有無、色調比較進行物質判別
發熒光量的測定對物質定性、定量分析
實驗目的與教學要求
1.掌握熒光顯微鏡的成像基本原理及其使用;
2.掌握暗視野顯微鏡的成像基本原理及其使用。
熒光素的特性
熒光顯微鏡技術在生命科學研究中的應用
1.對細胞結構或組分的定性、定位、半定量研究。
2.作為生物大分子篩選與鑒定的標記物。
二、暗視野顯微鏡的成像原理
通過特殊的暗視野聚光器,使照明光線改變途徑,不直接進入物鏡,而是傾斜地照射到樣品上,由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內,產生樣品的衍射圖象。
三、試劑與器材
青蛙、洋蔥、人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片(HE染色)
甲醇、1‰丫啶橙、濾紙、吸管、載玻片
熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡、普通光學顯微鏡
四、實驗內容和實驗步驟
1.蛙血細胞染色觀察:取少許蛙血→常規血涂片→涼干→甲醇固定10min→1‰丫啶橙染色5min→水洗→
室溫
干燥(濾紙擦干玻片底面)→熒光顯微鏡觀察(先低倍后高倍觀察)(可在同一玻片上觀察未熒光染色的血細胞)
2.取洋蔥→撕取一小片內表皮→平面單層鋪展于玻片上→室溫涼干→1‰丫啶橙染色5min→水洗(用吸管,小心掉片)→室溫干燥(或用濾紙擦干)
→熒光顯微鏡觀察
3.暗視野顯微鏡觀察蛙血細胞(示范)
4.觀察人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片(HE染色)
五、注意事項
熒光顯微鏡要在光線盡量暗的環境下觀察。
使用熒光顯微鏡時要注意不要直接觀察激發光源,保護眼睛。

暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環境下觀察。

電話:
13788993509
13788995069
021-64133189
傳真:
021-64129208
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